Детекция специфических антител в органах павших домашних свиней и диких кабанов после острой инфекции АЧС в эксперименте и при вспышках болезней в РФ

Введение.

АЧС распространяется в России с ноября 2007 г. по настоящее время в популяциях домашних свиней (234 вспышки) и диких кабанов (80 вспышек), с ярко выраженным геморрагическим синдромом и высокой летальностью (100%). Поэтому, для подтверждения АЧС в схеме лабораторных исследований в лабораториях РФ используют два метода, направленные на обнаружение вируса – реакцию прямой иммунофлуоресценции (РПИФ) и полимеразную цепную реакцию (ПЦР). При оценке диагностических характеристик реакций тестированием проб органов от 576 домашних свиней и кабанов, отобранных при вспышках АЧС диагностическая чувствительность ПЦР и РПИФ была 97(93-100)% – 93(87-100)%, соответственно, специфичность-100%. При параллельном использовании указанных методов достигается диагностическая точность 100% (в печати).

Кроме прямого обнаружения вируса Международным эпизоотическим бюро (МЭБ) рекомендованы исследования антител против вируса АЧС в тканях органов и в сыворотках крови для обнаружения хронической или субклинической инфекции (1). Так, при эпизоотиях АЧС в Испании в 60-70-80 годы прошлого столетия детекция антител серологическими методами широко использовалась для эпизоотологического мониторинга ферм и обнаружения инфицированных переболевших свиней (2, 3).

В данной работе представлены предварительные результаты исследования специфических антител против вируса АЧС у павших домашних свиней и диких кабанов после острого течения болезни, вызванной экспериментальным заражением полевыми изолятами вируса, а также при вспышках АЧС в полевых условиях.

Материалы и методы

– экстракты 20% суспензий проб органов от 13домашних и 2-х диких кабанов, экспериментально заражённых (интраназально или в/м) изолятами вируса АЧС, выделенных при вспышках болезни в 2007, 2008,2009,2010,2011 гг.. в Северо-Кавказском, Южном, Центральном, Северо-Западном и Приволжском (Оренбургская обл.) Федеральных округах;

– полевые пробы органов от павших домашних свиней и диких кабанов, доставленных в лабораторию ВНИИВВиМ в 2007-2011 гг. для подтверждения АЧС. Все пробы установлены положительными ПЦР- и в реакции прямой иммунофлуоресценции (РПИФ) в региональных лабораториях и ВНИИВВиМ;

– для обнаружения специфических антител использовали РНИФ. Компоненты для выполнения реакции – коммерческий Набор препаратов для дифференциальной иммунофлуоресцентной диагностики африканской чумы свиней, классической чумы свиней, б. Ауески (производство ВНИИВВиМ). Для приготовления тест-препаратов использовали культуру клеток CV-1, выращенную на стеклянных пластинках, заражённую авирулентным негемадсорбирующим штаммом вируса АЧС «691/88» (получен в 1989 г. из Швейцарского института вакцин, г.Базель);

-люминесцентная микроскопия – «Nikon» (Eclipse E200) с флуоресцентным модулем.

Результаты и обсуждение

В результате экспериментальной инфекции домашних свиней и диких кабанов полевыми изолятами, вызвавшими вспышки АЧС в РФ в 2008, 2009, 2010 и 2011 гг., была установлена острая форма течения болезни. У павших животных на 8 и 13 день п.з. параллельно с обнаружением вирусспецифической ДНК ПЦР и антигенов вируса (РПИФ), в тех же самых органах (лимфоузлы, селезёнки) были также обнаружены специфические антитела против вируса АЧС РНИФ в титрах от 5,3(2,8-7,8)- 8,0(6.5-9.4)log2, соответственно.

Для исследования специфических антител в полевых пробах тканей органы исследовали от павших свиней, поступивших во ВНИИВВиМ из очагов АЧС (для подтверждения диагноза). В исследования были включены 222 павших от АЧС свиней, у которых ПЦР и РПИФ были обнаружены компоненты вируса – вирусспецифическая ДНК и вирусспецифический внутриклеточный антиген. По эпизоотологическим данным, полученным на пробы, в фермах время от подозрения АЧС до гибели было 5(3-7) дней, а симптомы и посмертные изменения были характерны для острой или подострой форм течения болезни.

Результаты тестирования специфических антител в указанных пробах тканей органов, отобранные при вспышках АЧС в период 2008-2011 гг., представлены в табл.

Таблица
Частота обнаружения специфических антител к вирусу АЧС в вируссодержащих пробах тканей органов (пулы), отобранных от павших диких кабанов и домашних свиней при вспышках АЧС

Специфические антитела были обнаружены и у диких кабанов (павших и отстрелянных), и у домашних свиней (в фермах любого типа), независимо от времени отбора, т.е. 2008, 2009,2010, 2011 гг. Поскольку выборка проб для анализа была значительно выше в Северо-Кавказском и Южном ФО, как самых неблагополучных в пространстве и времени (202животных), все итоговые эпизоотологические тенденции отражены в этих регионах. Так, в энзоотичных по АЧС территориях, расположенных в этих ФО, в пробах от павших диких кабанов, обнаруженных при вспышках (или случаях) на территории Чечни (2009), Северной Осетии (2008), Ставропольского края (2009), в предгорьях Кавказа, Краснодарского края (2009, 2010), Карачаево-Черкессии (2011), антитела были обнаружены уже при вторичных вспышкахАЧС.

Также, антитела были обнаружены и при вспышках в Астраханской и Ростовской областях, а также в Тверской. Таким образом, антитела в тканях органов у павших от АЧС диких кабанов обнаруживали, независимо от продолжительности эпизоотии и распространения АЧС. В популяциях домашних свиней (ЛПХ, фермы, свинокомплексы) при вспышках АЧС антитела обнаруживали также во все годы АЧС в России: 2008, 2009, 2010, 2011 гг. при первичных и вторичных вспышках. Количественно из всех тестированных пулов (животных) процент обнаружения антител в тканях свиней всех видов составил 45%. Относительно видов отношение составило 33% диких и 49% домашних, т.е. пали от острой и подострой формы АЧС, а 67% диких кабанов и 51% домашних свиней (антитела не обнаружены) пали от сверхострой и острой формы. Уровни специфических антител у домашних и у диких кабанов варьировали от 4,3 до 9,0 log2.

Заключение

С диагностической точки зрения, специфические антитела в тканях органов инфицированных свиней пока не являются диагностически значимым объектом, так как они обнаружены только у 45% животных, ПЦР и РПИФ-положительных с острой или подострой формой течения, при которой методы обладают высокой чувствительностью и специфичностью (особенно при параллельном использовании). В отрицательных пробах органов, а также в 5056 пробах сывороток крови от домашних свиней инфицированной зоны (СК и Южный ФО) специфические антитела против вируса АЧС не были обнаружены.

Удивительно, что антитела, даже в довольно высокой концентрации, не блокируют внутриклеточные антигены и не мешают обнаруживать их РПИФ или иммуноферментным анализом. Остаётся важной необходимость постоянной оценки и понимания диагностического значения вирусологических и серологических тестов в будущем. Обнаружение антител к вирусу АЧС у значительного количества инфицированных павших домашних свиней и кабанов (вероятно после острого или подострого течения) болезни необходимо относить к патогенетическим механизмам естественного развития болезни. Специфические антитела у свиней при острой инфекции АЧС также можно рассматривать как возможный фактор риска селекции циркулирующего (патогенного) вируса и с последующим распространением вируса умеренной вирулентности.

Куринов В.В., Белянин С.А.

Leave a comment